miércoles, 5 de noviembre de 2008

Medios de Cultivo








Medios de cultivo


Es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos.
Tiene que contener como requerimiento:
Carbono, Oxigeno, Nitrógeno, Bióxido de Carbono e Hidrogeno.

Muchas bacterias sin embargo necesitan el aporte de algún factor de crecimiento aplicado de manera de suero, sangre y/o extracto de levadura.

Son clasificados por medio de origen
 Naturales. Preparados a partir de origen animal o vegetal.
 Sintéticos. Contienen composición química definida cualitativa y cuantitativamente.
 Semisinteticos. Son aquellos a los que se les agrega un factor de crecimiento.

Consistencia:
 Líquidos. Caldos, contienen nutrientes en solución acuosa.
 Sólidos. Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido.
 Semisólidos. Contienen 7.5g de agar por cada litro de caldo.

Composición:
 Comunes o universales. Utilizado para mantener colonias microbianas (agar común, caldo común).
 Enriquecido. Son a los que se les agrega sangre, suero, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen exigencias nutricionales.
 Selectivo. A estos se les alteran las condiciones físicas del medio que emitan el crecimiento de especies que no son de interés.



Agar

Sustancia inerte polisacarida (hidratos de Carbono) que se extrae de las algas y esta no es digerida por las bacterias por que no contiene elementos nutritivos.

Agar sangre:
En este agar crecen todo tipo de bacterias.

Agar manitol salado:
Es un agar selectivo, semisintietico y es enriquecido, en el cual crecen estafilococos.
Pueden ser estafilococos aureus o epidermis.
Aureus: las bacterias crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador del PH del color rojo al amarillo. Se le hace una prueba de coagulasa y son coagulasa positivos.
Epidermis: son estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona de color roja o púrpura.

Agar Mac Conkey:
Es el medio primario selectivo y diferencial empleado mas a menudo para el aislamiento y diferenciación de bacilos Gram negativos, fermentadores y no fermentadores de lactosa.
Las sales viliares y el cristal violeta actúan como inhibidores de gram positivo.
Las bacterias que fermentan la lactosa producen colonias de color rojo que pueden estar rodeadas de una zona opaca de vida a la precipitación de las sales viliares.
Las no fermentadoras dan colonias no coloras mas o menos transparentes.






Practica


Pasos realizados:
 Para comenzar a crear medios tomamos los materiales (matraz, cajas de petri, asas e hisopos) que se iban a necesitar y los desinfectamos. Lo cual nos tomo una clase.
 Una vez que teníamos en material listo sacamos la cuenta pesamos las cantidades de agar que se iban a necesitar para cada medio (agar sangre, Mac Conkey y Manitol salado). Los mezclamos con agua destilada y los mezclamos en el matraz.
 Ya que estaban listos desinfectamos los agares en los matraces. Enseguida los sacamos y los pusimos en la mesa la cual fue desinfectada durante el tiempo en que estaban estos en la olla.
 Le retiramos los grumos a los agares los mantuvimos líquidos, para el agar sangre se tuvo mas cuidado ya que este debía permanecer a una temperatura neutro para poder agregar la sangre y no coagulara, una vez que lo tuvimos se aplico la sangre.
 Enseguida se desenvolvieron las cajas de petri, y en medio de dos mecheros se vaciaron los agares.
 Antes de que coagularan les quitamos las burbujas que quedaban con el mechero y esperamos a que coagularan para poder sembrar.
 Una vez listos tomamos un hisopo y se tomo muestra de una garganta y se sembró en el agar.
 Los colocamos en la incubadora y fuimos a ver si ya había crecido algo a lo largo de 24 hrs.



Observaciones:



Cuando fuimos a ver los agares observamos que ya había colonias tanto en el agar sangre como en el manitol salado, pero no hubo ninguna en el Mac Conkey.
Se podían ver diplococos, estafilococos e incluso estreptococos tanto en el sangre como en el manitol.
El agar manitol salado se observaba de manera amarillenta lo cual nos hizo saber que había estafilococos aureus coagulasa negativos. Pero para comprobar le hicimos la prueba de la coagulasa. Para terminar la prueba solo me falto un paso que fue el de la tinción.

Por ultimo pusimos a esterilizar las cajas de petri otra vez para así poder tirar el medio y dejar limpias estas para poder se utilizadas.





jueves, 25 de septiembre de 2008

PrAcitca De tincion




Tinción GRAM

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos,bacilos,positivos,negativos, etc.) se basan justamente en la tinción de GRAM.

Material:

Equipo
· Mechero
· Microscopio óptico
· Platina caliente
· Portaobjetos

Reactivos
· Hisopos
· Frascos goteros
· Colorante cristal violeta
· Colorante safranina
· Aceite de inmersión
· Lugol
· Alcohol etílico


Procedimiento:

El proceso de la tinción es la siguiente:
Se toma la muestra que va a ser teñida y se le aplica el primer colorante que es el cristal violeta y se deja durante un minuto.
Después de esto se enjuaga con agua y se aplica el mordiente (yodo lugol) al igual que el primer colorante se deja actuar durante un minuto.
Se enjuaga una vez mas con agua y enseguida se decolora con alcohol cetona.
Ya hecho esto se aplica el 2do. Colorante la safranina y se deja actuar durante un minuto. Por ultimo se lava y se seca la muestra para poder ser observada.


Características

Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias).Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de su pared. La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano.



Observaciones:

Bueno pues esta practica la realizamos como 3 veces ya que cometimos muchos errores en el procedimiento pero pues ya en la ultima si hubo muestras en las que si alcanzaban a identificar las bacterias teñidas.

Practicas de Laboratorio


Tincion BAAR

Esta tinción demuestra la capacidad de bacterias teñidas de resistir a la decoloración por ácidos y alcoholes. Debido a su alto contenido en lípidos de su pared celular y presencia de ácidos micólicos que aumentan el carácter hidrófobo.
La mezcla en carbol-fuscina capaz de teñir las células en caliente. El carbol facilita la penetración de fuscina en la envoltura celular. Como decolorante orgánico se utiliza una mezcla de ácido y alcohol el Azul de metileno lo usamos como colorante de contraste.Los Bacilo Alcohol Ácido Resistente (BAAR) tras la unión de la fucsina, resisten el tratamiento orgánico y se verán teñidas de rosado/fuscia. El resto de las bacterias se decolorarán y se contrastarán con azul de metileno. El observar BAAR (+) en una muestra de esputo, no significa que esos bacilos sean necesariamente de M. tuberculosis.
Material:

Equipo
· Mechero
· Microscopio óptico
· Platina caliente
· Portaobjetos

Reactivos
· Hisopos
· Frascos goteros
· Aceite de inmersion
· Cristal violeta
· Lugol
· Carbol fucsina
· Alcohol etilico
· Colorante azul de metileno
· Solucion alcohol cetona
· Solucion de alcohol acido



Procedimiento:


primero se va a buscar el material, despues vamos a colocar el punte de tincion se le coloca el frotis para enseguida se fijado en el mechero despues con la fucsina se le agrega hasta que todo el frotis de la muestra quede cubierto de fucsina con el mechero
le vamos a dar fuego pero teniendo cuidado de que no tenga mas que tenga emicion de vapores y de que no llegue a su ponto de ebullición. Esto se hara durante 5min. Depues se va lavar el frotis despues de vamos a colocar el (AAR) durente 1 min. Se lava de nuevo y se le agrega el color de fondo. que eres azul de metileno se lava y lo dejamos estilar y ya despues lo observaremos en el microscopio.


Observaciones:


Bueno pues al finalizar el procedimiento fuimos a observar la muestra y pues no pudimos indentificar bien ya que la coloracion no estaba bien hecha.


Pero pues en internet buscamos y bajamos imagenes.



martes, 19 de agosto de 2008

Bienvenidos

Bueno pues este blopg esta hecho especialmente para la materia de microbiologìa en el cbtis. 19
agradeceria mucho sus comentarios y dudas acerca de los temas que se presentaran.

Gracias