miércoles, 5 de noviembre de 2008

Medios de Cultivo








Medios de cultivo


Es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos.
Tiene que contener como requerimiento:
Carbono, Oxigeno, Nitrógeno, Bióxido de Carbono e Hidrogeno.

Muchas bacterias sin embargo necesitan el aporte de algún factor de crecimiento aplicado de manera de suero, sangre y/o extracto de levadura.

Son clasificados por medio de origen
 Naturales. Preparados a partir de origen animal o vegetal.
 Sintéticos. Contienen composición química definida cualitativa y cuantitativamente.
 Semisinteticos. Son aquellos a los que se les agrega un factor de crecimiento.

Consistencia:
 Líquidos. Caldos, contienen nutrientes en solución acuosa.
 Sólidos. Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido.
 Semisólidos. Contienen 7.5g de agar por cada litro de caldo.

Composición:
 Comunes o universales. Utilizado para mantener colonias microbianas (agar común, caldo común).
 Enriquecido. Son a los que se les agrega sangre, suero, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen exigencias nutricionales.
 Selectivo. A estos se les alteran las condiciones físicas del medio que emitan el crecimiento de especies que no son de interés.



Agar

Sustancia inerte polisacarida (hidratos de Carbono) que se extrae de las algas y esta no es digerida por las bacterias por que no contiene elementos nutritivos.

Agar sangre:
En este agar crecen todo tipo de bacterias.

Agar manitol salado:
Es un agar selectivo, semisintietico y es enriquecido, en el cual crecen estafilococos.
Pueden ser estafilococos aureus o epidermis.
Aureus: las bacterias crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador del PH del color rojo al amarillo. Se le hace una prueba de coagulasa y son coagulasa positivos.
Epidermis: son estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona de color roja o púrpura.

Agar Mac Conkey:
Es el medio primario selectivo y diferencial empleado mas a menudo para el aislamiento y diferenciación de bacilos Gram negativos, fermentadores y no fermentadores de lactosa.
Las sales viliares y el cristal violeta actúan como inhibidores de gram positivo.
Las bacterias que fermentan la lactosa producen colonias de color rojo que pueden estar rodeadas de una zona opaca de vida a la precipitación de las sales viliares.
Las no fermentadoras dan colonias no coloras mas o menos transparentes.






Practica


Pasos realizados:
 Para comenzar a crear medios tomamos los materiales (matraz, cajas de petri, asas e hisopos) que se iban a necesitar y los desinfectamos. Lo cual nos tomo una clase.
 Una vez que teníamos en material listo sacamos la cuenta pesamos las cantidades de agar que se iban a necesitar para cada medio (agar sangre, Mac Conkey y Manitol salado). Los mezclamos con agua destilada y los mezclamos en el matraz.
 Ya que estaban listos desinfectamos los agares en los matraces. Enseguida los sacamos y los pusimos en la mesa la cual fue desinfectada durante el tiempo en que estaban estos en la olla.
 Le retiramos los grumos a los agares los mantuvimos líquidos, para el agar sangre se tuvo mas cuidado ya que este debía permanecer a una temperatura neutro para poder agregar la sangre y no coagulara, una vez que lo tuvimos se aplico la sangre.
 Enseguida se desenvolvieron las cajas de petri, y en medio de dos mecheros se vaciaron los agares.
 Antes de que coagularan les quitamos las burbujas que quedaban con el mechero y esperamos a que coagularan para poder sembrar.
 Una vez listos tomamos un hisopo y se tomo muestra de una garganta y se sembró en el agar.
 Los colocamos en la incubadora y fuimos a ver si ya había crecido algo a lo largo de 24 hrs.



Observaciones:



Cuando fuimos a ver los agares observamos que ya había colonias tanto en el agar sangre como en el manitol salado, pero no hubo ninguna en el Mac Conkey.
Se podían ver diplococos, estafilococos e incluso estreptococos tanto en el sangre como en el manitol.
El agar manitol salado se observaba de manera amarillenta lo cual nos hizo saber que había estafilococos aureus coagulasa negativos. Pero para comprobar le hicimos la prueba de la coagulasa. Para terminar la prueba solo me falto un paso que fue el de la tinción.

Por ultimo pusimos a esterilizar las cajas de petri otra vez para así poder tirar el medio y dejar limpias estas para poder se utilizadas.